產品系列
大腸桿菌DNA聚合酶
大腸桿菌DNA聚合酶I，可以在單鏈DNA模板和與其配對的引物存在的條件下，催化5'→3'方向的DNA合成[1]。同時還具備雙鏈DNA缺刻(nick)處特異性的5'→3'外切酶活性、單鏈特異性的3'→5'外切酶活性以及核糖核酸酶H活性[2]。本品的DNA合成酶活性和雙鏈DNA缺刻(nick)處特異性的5'→3'外切酶活性，可以實現缺刻處3'-OH起始的DNA合成和5'端單鏈DNA的降解，實現缺口平移。此聚合酶的單鏈特異性的3'→5'外切酶活性可以起到DNA合成的校驗作用(proofreading)。在有dNTP存在的情況下，更多地表現為DNA聚合酶活性；而當dNTP不存在的情況下，更多表現為單鏈特異性的外切酶活性，例如可以表現為平末端雙鏈DNA中的任一條鏈的5'端的5'→3'外切酶活性。
- 商品名稱： 大腸桿菌DNA聚合酶
- 產品描述
- 產品說明
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產品編號 產品名稱 產品包裝 產品價格 RTBR23-069 大腸桿菌DNA聚合酶 1000U 409.00元 大腸桿菌DNA聚合酶I，可以在單鏈DNA模板和與其配對的引物存在的條件下，催化5'→3'方向的DNA合成[1]。同時還具備雙鏈DNA缺刻(nick)處特異性的5'→3'外切酶活性、單鏈特異性的3'→5'外切酶活性以及核糖核酸酶H活性[2]。本品的DNA合成酶活性和雙鏈DNA缺刻(nick)處特異性的5'→3'外切酶活性，可以實現缺刻處3'-OH起始的DNA合成和5'端單鏈DNA的降解，實現缺口平移。此聚合酶的單鏈特異性的3'→5'外切酶活性可以起到DNA合成的校驗作用(proofreading)。在有dNTP存在的情況下，更多地表現為DNA聚合酶活性；而當dNTP不存在的情況下，更多表現為單鏈特異性的外切酶活性，例如可以表現為平末端雙鏈DNA中的任一條鏈的5'端的5'→3'外切酶活性。
用途：DNA合成；雙鏈DNA 5'突出末端(5' overhang)的補平；雙鏈DNA 3'突出末端(3' overhang)的削平；cDNA第二條鏈合成[4]；與DNase I一起使用，進行DNA切口平移；DNA的切口翻譯以獲得具有高比活性的探針。
包裝清單：
產品編號 產品名稱 包裝 1 E.coli DNA Polymerase I (10U/μl) 100μl 2 10X Reaction Buffer 400μl － 說明書 1份 保存條件：
-20ºC保存，兩年有效。注意事項：
1.由于本品具有外切酶活性，在進行反應前應盡量避免環境溫度偏高導致的DNA鏈被切除。
2.本品不具有內切酶活性，且本產品不包含DNase I，進行切口翻譯反應時必須另外添加DNase I。
3.對本品劇烈震蕩或攪拌會使酶失活。
4.本品與DNA的親和力較高，加入過量的酶易發生凝集作用(Aggregation)，影響反應的進行。
5.本品可使用帶修飾的核苷酸(例如生物素、地高辛、熒光標記核苷酸)作為DNA合成的底物，以用于DNA探針的標記。
6.酶使用時宜存放在冰盒內或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存。
7.本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
8.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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使用說明：
1. 雙鏈DNA 5'突出末端(5' overhang)的補平：
a. 對于雙鏈DNA 5'突出末端(5' overhang)的補平，參考下表在冰浴中配制反應體系(以20μl體系為例)。Reagent Volume Final Concentration Nuclease-Free Water (16-x)μl - dsDNA with 5' overhang xμl ~0.5µM or 5-200ng/µl 10X Reaction Buffer 2μl 1X dNTP Mix (2mM each) 1μl 100μM E.coli DNA Polymerase I (10U/µl) 1μl 0.5U/µl Total Volume 20μl - 注1：在進行末端補平實驗時可適當減少酶量，避免在外切酶活性的作用下導致模板的缺失。
注2：如果同時進行多個反應，可以把上表中除dsDNA with 5' overhang之外的所有溶液和酶提前混合，分裝到各反應管，最后再加入dsDNA with 5' overhang。
注3：dsDNA with 5' overhang如果是寡核苷酸，最終濃度可以約為0.5µM；如果是消化后的DNA質粒等最終濃度可以約為5-200ng/μl。
b. 按上表設置好反應體系后，適當輕輕混勻反應體系，隨后低速離心以使粘附在管壁上的液體沉淀至管底。
c. 反應條件：37ºC孵育20分鐘。注：反應時間可以根據實際情況酌情適當調節。
d. 終止反應：75ºC孵育20分鐘使E.coli DNA Polymerase I失去活性。
2. 雙鏈線性DNA的消化：
a. 對于雙鏈線性DNA消化，參考下表在冰浴中配制如下反應體系(以20μl體系為例)。Reagent Volume Final Concentration Nuclease-Free Water (17-x)μl - dsDNA xμl ~0.5µM or 5-200ng/µl 10X Reaction Buffer 2μl 1X E.coli DNA Polymerase I (10U/µl) 1μl 0.5U/µl Total Volume 20μl - 注：如果同時進行多個反應，可以把上表中除dsDNA之外的所有溶液和酶提前混合，分裝到各反應管，最后再加入dsDNA。
b. 按上表設置好反應體系后，適當輕輕混勻反應體系，隨后低速離心以使粘附在管壁上的液體沉淀至管底。
c. 反應條件：37ºC孵育20分鐘。注：反應時間可以根據實際情況酌情適當調節。
d. 終止反應：75ºC孵育20分鐘使聚合酶失去活性。
3. 其它用途可以參考適當的文獻資料進行。
標簽：
產品詢價
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